预杂交1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。2）用等体积的HYB＋取代HYB－。3）60℃水浴，原位杂交检测，预杂交4小时以上。杂交1）吸去预杂交的HYB＋，加上100ul已加入探针的HYB＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..2）60℃温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。DNA探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比，DNA探针与靶mRNA分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过5%的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无法正确检测。将32P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，荧光原位杂交技术，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。杂交结束后，原位杂交，去除杂交液，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×SSC和0.1%SDS溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗一次，同时应避免膜干涸。68℃用300-500ml1×SSC和0.1%SDS溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml0.2×SSC和0.1%SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。原位杂交技术-贝科新肽(在线咨询)-原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司实力不俗，信誉可靠，在湖北武汉的化学试剂等行业积累了大批忠诚的客户。贝科新肽带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌，共创美好未来！)