冷冻透射电子显微镜是在传统TEM的基础上发展而来的一种新型电镜技术，其优势是能够在接近外泌体天然状态的条件下，呈现其超微结构，避免了传统TEM中固定、脱水、染色等处理过程对於外泌体形态和结构的破坏。其原理是将外泌体样品快速冷冻至液氮温度（-196℃），使样品中的水分迅速玻璃化（形成无定形冰），避免水分结晶对於外泌体结构的破坏；然后将冷冻后的样品放入Cryo-TEM样品室（维持液氮温度），利用电子束穿透样品，形成外泌体的超微结构图像，外泌体WB测试，分辨率可达到0.1~0.2nm，能够清晰呈现外泌体的天然形态、脂质双层膜、内部成分及空间结构。与传统TEM相比，Cryo-TEM无需进行固定、脱水、染色等处理，样品直接在冷冻状态下进行观察，能够地保留外泌体的天然形态和结构，反映外泌体在体内的真实状态。此外，Cryo-TEM还可以结合电子断层扫描技术，实现外泌体三维结构的重构，进一步深入了解外泌体的空间形态和内部成分分布，为外泌体的结构与功能研究提供更强大的技术支撑——冷冻电子断层扫描（Cryo-ET）结合了冷冻固定技术和电子断层扫描技术，能够在接近天然状态下重构外泌体的3D结构，分辨率可达1~2nm，是研究外泌体空间结构的重要工具。主流电镜技术与流程传统透射电镜（负染TEM，常用）样品制备：纯化外泌体悬液（离心+0.22μm过滤），滴至Formvar/碳膜铜网吸附（5–30min）；2%预固定，再用1–2%醋酸铀（UA）或2%磷钨酸（PTA，pH6.5–7.0）负染（0.5–2min），吸干后室温干燥。成像参数：加速电压80–120kV，放大倍数50，000–100，000×，低剂量模式避免样品损伤。典型图像：双层膜清晰，呈亮边暗背景的杯状/圆形，直径符合30–150nm范围；盐结晶为规则几何形、细胞碎片不规则，需排除。外泌体WB测试-武汉贝科新肽(图)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是湖北武汉,化学试剂的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在贝科新肽领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创贝科新肽更加美好的未来。)